摘 要：建立了猪肉中6种玉米赤霉醇类化合物残留量的免疫亲和柱净化液相色谱串联质谱（IACLCM/M）分析方法酶解后的样品用乙醚提取提取液浓缩后用三氯甲烷溶解NaO溶液反萃取经免疫亲和柱富集和净化后采用LCM/M进行测定外标法定量在himadzuhimpackVPOC18反相柱上分离梯度洗脱流动相为乙腈和mmol/L乙酸铵溶液；质谱采集为电喷雾负离子多反应监测模式6种目标物的线性范围为0～00μg/L相关系数（R）大于0999定量限（LOQ）在00～063μg/kg之间；添加浓度在10～0μg/kg范围内方法回收率为713%～937%相对标准偏差在37%～97%之间该方法灵敏度高、重现性好适用于猪肉样品中痕量玉米赤霉醇类药物残留的测定
关键词：玉米赤霉醇类化合物；液相色谱串联质谱；免疫亲和柱；猪肉
1 引 言
玉米赤霉醇类化合物属于非甾体同化激素主要包括α玉米赤霉醇、β玉米赤霉醇、α玉米赤霉烯醇、β玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和玉米赤霉烯酮等是由镰刀霉菌产生的一类弱雌激素真菌毒素能促进蛋白质的合成提高家禽饲料转化率和胴体瘦肉率但玉米赤霉醇对促进性激素结合受体等有抑制作用会引起人体性机能紊乱及影响第二性征的正常发育在外部条件诱导下还可能致癌＼1＼因此各国陆续公布法令禁止在畜牧业饲养过程中使用这类激素1996年欧盟禁止将玉米赤霉醇激素类药物应用于畜禽养殖＼＼我国农业部第3号公告明确规定禁止将玉米赤霉醇用于所有食品动物＼3＼所有可食动物食品中不得检出
目前玉米赤霉醇类化合物的检测方法主要有薄层色谱法（LC）＼＼、酶联免疫法（ELIA）＼＼、气相色谱质谱法（CM）＼6＼、液相色谱法（PLC）＼7＼及液相色谱串联质谱法（LCM/M）＼8～10＼等样品前处理净化技术主要有液液萃取和固相萃取＼7～10＼其中液液萃取操作繁琐且需要使用大量有机溶剂；固相萃取净化常用C18柱和L柱具有使用有机溶剂少、选择性较强、分离时间短等优点但专属性差免疫亲和柱（ImmunoaffinitycolumnIAC）具有独特的专属性、高富集率和良好的净化效能能显著提高食品中农兽药残留检测灵敏度＼11～1＼基于LCM/M技术和免疫亲和柱的优点本研究建立了采用免疫亲和柱净化LCM/M同时检测猪肉中6种玉米赤霉醇类化合物残留量的方法
实验部分
1 仪器与试剂
LC0A液相色谱（日本himadzu公司）API000串联质谱仪（美国A公司）；011igital旋转蒸发仪（德国eidolph公司）；A1000超声波清洗器（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；X型振荡器（江苏康健医疗用品有限公司）；330台式高速冷冻离心机（德国igma公司）；ZY11恒温培养振荡器（上海智诚分析仪器制造有限公司）；NEVAP116氮气吹干仪（美国OrganomationAssociates公司）；MilliQ超纯水系统（美国Millipore公司）
免疫亲和柱（IACEP柱容量10μg1mL北京中检维康技术有限公司℃冰箱保存）；L固相萃取柱（60mg3mL美国upelco公司）C18固相萃取柱（00mg3mL美国upelco公司）；β葡萄糖苷酸/硫酯酸复合酶（19311units/mL美国igma公司）；乙腈、甲醇（色谱纯美国EIA公司）；乙醚、乙酸乙酯、三氯甲烷、氢氧化钠、乙酸钠等试剂为分析纯；实验用水均为超纯水
α玉米赤霉醇、β玉米赤霉醇、α玉米赤霉烯醇、β玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和玉米赤霉烯酮标准品纯度≥980%均购自美国igma公司
溶液的配制
（1）标准品溶液 分别准确称取各玉米赤霉醇类标准品适量用甲醇溶解配制成100mg/L的标准储备液分别吸取各标准储备液10mL于100mL容量瓶中甲醇定容配制成10mg/L的混合标准溶液（）乙酸钠缓冲液 称取680g乙酸钠用900mL超纯水溶解用冰乙酸调至p80并定容至1L（3）磷酸盐溶液（P） 分别称取800gNaCl90gNaPO·1O0gPO和00gCl用900mL超纯水溶解再用10mol/LNaO溶液调至p7并定容至1L
3 色谱及质谱条件
色谱柱：himadzuhimpackVPOC18（10mm×0mmμm）流动相：A相为乙腈相为mmol/L乙酸铵溶液；梯度洗脱程序：0～0min%A；0～70min%～70%A；70～7min70%～%A；7～80min%A；流速：030mL/min；柱温：0℃；进样量：10μL
质谱条件：电喷雾负离子多反应监测检测（EI-MRM）；电喷雾电压：